多频超声波提取山莱萸多糖-超声波提取

1.方法

1.1山茱萸多糖提取液制备参考张茜等的方法。山茱萸鲜果无损采摘，清洗，置于50 ℃水中浸泡15min，取出去核，保留果肉并在 50 ℃下烘干备用。将山茱萸干果粉碎，过 40目筛。称取适量山茱萸干果粉末，加入石油醚进行脱脂处理，50 ℃回 流 4 h后加入一定量的水，在超声波辅助条件下进行提取，提取液分别用纱布和滤纸抽滤1次，然后用旋转蒸发器在50 ℃下浓缩至提取液的1/5。

在浓缩液中加入 试剂（正丁醇与三氯甲烷的比 例为 5∶2）进行脱蛋白处理，充分振荡 15 min 后置于分液漏斗中静置，待分层明显后收集上面水层，如此 反复操作 3 次。在得到的水层溶液中按照5 g/L 的 用量加入活性炭进行 30 min 的脱色处理，过滤活性炭，所得即为山茱萸多糖提取液。

1.2 山茱萸多糖制备参考郭耀东等的方法。 按照“1.3.1”的步骤制得山茱萸多糖提取液，在提取液中加入3倍体积95%乙醇，静置 5 h后离心，所得固体于50 ℃下干燥至恒重，即为山茱萸多糖。

1.3 山茱萸多糖含量测定 1）标准曲线制作。参考王彦平等的方法。以葡萄糖为标准品，精密吸取7个浓度的葡萄糖供试液2.0mL，分别加入5%的苯酚溶液1.0 mL，摇匀后迅速加入浓硫酸5.0 mL，摇匀，置于40 ℃水浴中显色 30 min，取出置于冰水中快速冷却以终止显色反应，然后置于室温条件下10 min，于波长 488 nm处用紫外可见分光光度计测定吸光度。以吸光度。

（A）为纵坐标，葡萄糖浓度（μg/mL）为横坐标绘制葡萄糖标准曲线，并得出回归方程。

2）换算因子计算。准确称取“1.3.2”中制得的山 茱萸多糖 10.0 mg，加水定容至 100 mL。准确吸取该山茱萸多糖稀释液2.0 mL，按照标准曲线制作的步骤和方法加入苯酚、浓硫酸等试剂进行显色反应，于 波长 488 nm 处测定吸光度，由回归方程得出山茱萸多糖中的葡萄糖含量C0，按式（1）计算换算因子f。

3）山茱萸多糖提取率的测定。利用“1.3.1”中得到的山茱萸多糖提取液，稀释至合适浓度。精确吸取2 mL稀释液，按照标准曲线制作的步骤和方法加入苯酚、浓硫酸等试剂进行显色反应，于波长 488 nm处测定吸光度，由回归方程得出山茱萸提取液中的葡萄糖含量 C，按式（2）计算山茱萸多糖提取率 。

式中，C为稀释液的葡萄糖含量（mg/mL）；D为稀释倍数；f 为测算出的换算因子；m为称取的山茱萸干果质量（mg）。

结论

与无超声波辅助浸提相比，超声波辅助提取能有效提高山茱萸多糖的提取率，且双频组合超声波优于单频超声波。基于超声频率、料液比、浸提温度和浸提时间等因素对山茱萸多糖提取率影响的研究，发现影响主次关系是超声频率（A）>浸提温度（C）>浸提时间（D）>料液比（B），**工艺组合为 A2B2C3D3，**工艺条件为超声频率双频28/45 kHz，浸提温度52 ℃，浸提时间80 min，液料比1∶6，山茱 萸多糖提取率为18.92%。